肥猜中粪大肠菌群的测定

肥猜中粪大肠菌群的测定

1　范畴

本尺度划定了肥猜中粪大肠菌群的测定办法。

2　界说

粪大肠菌群 fecal coliforms

系指一群在44.5 ℃± 0.5 ℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

粪大肠菌群数为每克(毫升)肥料样品中粪大肠菌群的最大概数(MPN)。

3　设置装备摆设和质料(内容略)

4　培育基和试剂

4.1　培育基：依照附录A的划定。

4.2　革兰氏染色液：依照附录B的划定 (略)。

5　查验步调

5.1　样品浓缩

在无菌操纵下称取样品10.0 g 或汲取样品 10 mL ，参加到带玻璃珠的 90 mL 无菌水中，置于摇床上 200 r/min 充实振荡 30 min ，即成 10 -1   浓缩液。

用无菌移液管汲取 5.0 mL 上述浓缩液参加到 45 mL 无菌水中，混匀成10 -2   浓缩液。如许顺次浓缩，辨别失掉10 -3 ，10 -4   等浓度浓缩液(每个浓缩度须改换无菌移液管)。

5.2　乳糖发酵实验

选取三个一连相宜浓缩液，辨别汲取差别浓缩液 1.0 mL 参加到乳糖胆盐发酵管内，每一浓缩度接种 3 支发酵管，置 44.5 ℃± 0.5 ℃恒温水浴或隔水式培育箱内，培育 24 h ± 2 h 。假如一切乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性;假如有产酸产气或只产酸的发酵管，则按 5.3 举行。

5.3　分散培育

从产酸产气或只产酸的发酵管中辨别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36 ℃± 1 ℃条件下培育18 h ～ 24 h 。

5.4　证明实验

从5.3分散平板上挑取可疑菌落，举行革兰氏染色。染色反响阳性者为粪大肠菌群阴性;假如为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取异样菌落接种在乳糖发酵管中，置44.5℃±0.5℃条件下培育 24h  ± 2 h 。察看产气状况，不产气为粪大肠菌群阴性;产气为粪大肠菌群阳性。

5.5　后果

证明实行为粪大肠菌群阳性的，依据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克(毫升)肥料样品中的粪大肠菌群数。

附　录　A

(标准性附录)

培育基

A.1　 乳糖胆盐发酵培育基

制法：将卵白胨、猪胆盐及乳糖消融于蒸馏水中，校正 pH ，参加溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管 9 mL ，并放入一支颠倒的小套管，高压灭菌 115 ℃ 15 min 。

注 1 ：初发酵培育基。

注 2 ：粪大肠菌群细菌发酵乳糖产酸产气使培育液由紫色酿成黄色,套管内充有气体。

A.2　伊红美蓝琼脂培育基

制法：将卵白胨、乳糖、磷酸氢二钾消融于蒸馏水中，校正 pH ，投入琼脂并加热消融，分装于三角瓶中，高压灭菌 115 ℃ 15 min 备用。伊红和美蓝溶液辨别高压灭菌 121 ℃ 20 min 。临用时加热熔化培育基，冷却至 50 ℃～ 55 ℃，参加无菌的伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

A.3　乳糖发酵培育基

制法：将卵白胨及乳糖溶于水中，校正pH ，参加指示剂，按查验要求分装3 mL～ 5 mL，并放入1支颠倒的小套管，高压灭菌115 ℃ 15 min 。