农用十大赌博菌剂国度尺度

农用十大赌博菌剂

前 言

本尺度的5.1、5.3和第8章条文为强迫性条款，其他为保举性条款。

本尺度的附录A、附录C和附录D为标准性附录，附录B为材料性附录。

农用十大赌博菌剂

1　范畴

本尺度划定了农用十大赌博菌剂(即十大赌博接种剂)的术语和界说、产品分类、要求、实验办法、查验规矩、包装、标识、运输和储存。

本尺度实用于农用十大赌博菌剂类产品。

2　标准性援用文件(略)

3　术语和界说(略)

4　产品分类

产品按剂型可分为液体、粉剂、颗粒型;按内含的十大赌博品种或功效特征可分为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类十大赌博菌剂、硅酸盐十大赌博菌剂、光合细菌菌剂、无机物料腐熟剂、促生菌剂、菌根菌剂、生物修复菌剂等。

5　要求

5.1　菌种

消费用的十大赌博菌种应宁静、无效。消费者应提供菌种的分类判定陈诉，包罗属及种的学名、形状、心理生化特征及判定根据等完备材料。消费者应提供菌种宁静性评价材料。接纳生物工程菌，应具有容许大面积开释的生物宁静性有关批文。

5.2　产品表面(略)

5.3　产品技能目标

5.3.1　农用十大赌博菌剂产品的技能目标见表1，此中无机物料腐熟剂产品的技能目标按表2实行。

表1 农用十大赌博菌剂产品的技能目标

项 目		剂 型
		液 体	粉 剂	颗 粒
无效活菌数(cfu)a ，亿/g(mL)	≥	2.0	2.0	1.0
霉菌杂菌数，个/g(mL)	≤	3.0×106	3.0×106	3.0×106
杂菌率， %	≤	10.0	20.0	30.0
水分，%	≤	-	35.0	20.0
细度，%	≥	-	80	80
pH值		5.0~8.0	5.5~8.5	5.5~8.5
保质期b，月	≥	3	6
a 复合菌剂，每一种无效菌的数目不得少于0.01亿/g(mL)；以单一的胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus）制成的粉剂产品中无效活菌数不少于1.2亿/g。 b 此项仅在监视部分或仲裁两边以为有须要时检测。

表2 无机物料腐熟剂产品的技能目标

项目		剂 型
		液 体	粉 剂	颗 粒
无效活菌数(cfu)， 亿/g(mL)	≥	1.0	0.50	0.50
纤维素酶活a，U/g（mL）	≥	30.0	30.0	30.0
卵白酶活b，U/g(mL)	≥	15.0	15.0	15.0
水 分，%	≤	-	35.0	20.0
细 度，%	≥	-	70	70
pH值		5.0～8.5	5.5～8.5	5.5～8.5
保质期c，月	≥	3	6
a 以农作物秸秆类为腐熟工具测定纤维素酶活。 b 以畜禽粪便类为腐熟工具测定卵白酶活。 c 此项仅在监视部分或仲裁两边以为有须要时检测。

5.3.2　农用十大赌博菌剂产品中有害化目标见表3。

表3 农用十大赌博菌剂产品的有害化技能目标

参数		尺度极限
粪大肠菌群数，个/g(mL)	≤	100
蛔虫卵殒命率，%	≥	95
砷及其化合物（以As计），mg/kg	≤	75
镉及其化合物（以Cd计），mg/kg	≤	10
铅及其化合物（以Pb计），mg/kg	≤	100
铬及其化合物（以Cr计），mg/kg	≤	150
汞及其化合物（以Hg计），mg/kg	≤	5

6　实验办法

6.1　仪器设置装备摆设(略)

6.2　试剂(略)

6.3　产品参数的检测

6.3.1　表面(感官)的测定

取大批样品放到白色珐琅盘(或白色塑料调色板)中，细心察看样品的颜色、外形、质地。

6.3.2　无效活菌数的测定

接纳平板计数法，依据所测十大赌博的品种选用相宜的培育基。

若接纳最大大概数(Most Probable Number，MPN)5管法，依照附录C的划定。

6.3.2.1　系列浓缩

称取样品10 g(准确到0.01 g)，参加带玻璃珠的100 mL的无菌水中(液体菌剂取l0.0 mL参加90 mL的无菌水中)，静置20 min，在旋转式摇床上200 r/min充实振荡30 min，即成母液菌悬液(底子液)。

用无菌移液管辨别汲取5.0mL上述母液菌悬液参加45 mL无菌水中，按1:10举行系列浓缩，辨别失掉1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……浓缩的菌悬液(每个浓缩度应改换无菌移液管)。

6.3.2.2　加样及培育

每个样品取3个一连相宜的浓缩度，用无菌移液管辨别汲取差别浓缩度菌悬液0.1 mL，加至事后制备好的固体培育基平板上，辨别用无菌玻璃刮刀将差别浓缩度的菌悬液匀称地涂于琼脂外表。

每一浓缩度反复3次，同时以无菌水作空缺比较，于相宜的条件下培育。

6.3.2.3　菌落辨认

依据所检测菌种的技能材料，每个浓缩度取差别范例的代表菌落经过涂片、染色、镜检等妙技[miào jì]确认无效菌。当空缺比较培育皿呈现菌落数时，检测后果有效，应重做。

6.3.2.4　菌落计数

以呈现20~300个菌落数的浓缩度的平板为计数尺度(丝状真菌为10~150个菌落数)，辨别统计无效活菌数量和杂菌数量。当只要一个浓缩度，其均匀菌落数在20～300个之间时，则以该均匀菌落数盘算。如有两个浓缩度，其均匀菌落数均在20～300个之间时，应按两者菌落总数之比值决议。若其比值小于即是2应盘算两者的均匀数;若大于2则以浓缩度小的菌落均匀数盘算。无效活菌数按式(1)或式(2)盘算：

nm =

kv1/(m0v2) ×10-8 …………………(1) nv =

kv1/(v0v2) ×10-8 …………………(2)

式中：

nm — 质量无效活菌数， 亿/g

nv — 体积无效活菌数， 亿/mL

— 菌落均匀数， 个

k — 浓缩倍数

v1 — 底子液体积， mL

v2 — 菌悬液参加量， mL

v0 — 样品量， mL

m0 — 样品量， g

6.3.3　霉菌杂菌数的测定

接纳马丁培育基，测定办法同6.3.2。

6.3.4　杂菌率的测定

除样品无效菌外别的的菌均为杂菌。样品中杂菌率按式(3)盘算：

m = n1/(n1+n)×100 …………………(3)

式中：

m — 样品杂菌率， %

n1 — 杂菌数， 亿/g(mL)

n — 无效活菌数， 亿/g(mL)

6.3.5　水分的测定

将空铝盒置于枯燥箱中105 ℃±2 ℃烘干 0.5 h，冷却后称量记载空铝盒的质量。然后称取2份平行样品(颗粒型样品，应先破坏过1.0 mm实验筛)，每份20 g(准确到0.01 g)，辨别参加铝盒中并记载质量。将装好样品的铝盒置于枯燥箱中105 ℃±2 ℃下烘干4 h~6 h。取出置于枯燥器中冷却20 min落伍行称量。水分含量按式(4)盘算(后果为两次测定的均匀值)：

w = (m1- m2)/( m1- m0) ×100 …………………(4)

式中：

w — 样品水分含量， %

m0 — 空铝盒的质量， g

m1 — 样品和铝盒的质量， g

m2 — 烘干后样品和铝盒的质量， g

6.3.6　细度的测定

6.3.6.1　粉剂样品

称取样品50 g(准确到0.1 g)，放入300 mL烧杯中，加200 mL水浸泡10 min~30 min后倒入孔径0.18 mm的实验筛中，然后用水冲洗，并用刷子悄悄地刷筛面上的样品，直至筛下游出净水为止。将实验筛连同筛上样品放入枯燥箱中，在105 ℃±2 ℃烘干4 h ~6 h。冷却后称量筛上样品格量。样品细度按式(5)盘算：

s ={1- m1/[ m0(1-w)]} ×100 …………………(5)

式中：

s — 筛下样品格量分数， %

m0 — 样品格量， g

w — 样品含水量， %

m1 — 筛上干样品格量， g

6.3.6.2　颗粒样品

称取样品50 g(准确到0.1 g)，将两个差别孔径的实验筛(1.0 mm和4.75 mm)摞在一同放在底盘上(大孔径实验筛放在下面)。样品倒入大孔径实验筛内筛样品，然后称小孔径实验筛上的样品格量。颗粒细度按式(6)盘算：

g = m1 /m0 ×100 …………………(6)

式中：

g — 样品格量分数， %

m1 — 小孔径实验筛上样品格量，g

m0 — 样 品 质 量， g

6.3.7　pH值的测定

翻开酸度计电源预热30 min，用尺度溶液校准。

pH值的测定，每个样品反复三次，盘算三次的均匀值。

6.3.7.1　液体样品

用量筒取40mL样品放入50 mL的烧杯中，间接用酸度计测定，仪器读数波动跋文录。

6.3.7.2　粉剂样品

称取样品15 g，放入50 mL的烧杯中，按1:2(样品:无离子水)的比例将无离子水加到烧杯中(假如样品含水量低，可依据基质范例按1:3~1:5的比例加无离子水)，搅拌匀称。然后静置30 min，测样品悬液的pH值，仪器读数波动跋文录。

6.3.7.3　颗粒样品

样品先研碎过1.0 mm实验筛，依照6.3.7.2的办法测定。

6.3.8　粪大肠菌群数的测定

应切合GB/T 19524.1《肥猜中粪大肠菌群的测定》的划定。

6.3.9　蛔虫卵殒命率的测定

应切合GB/T 19524.2《肥猜中蛔虫卵殒命率的测定》的划定。

6.3.10　纤维素酶活、卵白酶活的测定

应切合附录D的划定。

6.3.11　砷、镉、铅、铬、汞的测定

应切合GB 18877—2002中的5.12~5.17的划定。

6.3.12　保质期的查验

在产品阐明书标明的保质期前，按6.3.1~6.3.11办法测定产品响应目标。

7　查验规矩

本尺度中产品技能目标的数字修约应切合GB 8170的划定;产品格量及格判断应切合GB 1250中修约值比力法的划定。

7.1　抽样

按每一发酵罐菌液(或每批固体发酵)加工成的产品为一批，举行抽样查验，抽样历程严厉制止杂菌净化。

7.1.1　抽样东西

无菌塑料袋(瓶)，金属勺、抽样器、量筒、牛皮纸袋、胶水、抽样封条及抽样单等。

7.1.2　抽样办法和数目

一样平常在制品库中抽样，接纳随机法抽取。

抽样以件为单元，小包装以每一包装箱为一件。随机抽取3~5件，每件中随机抽取一袋(瓶);若每袋(瓶)包装小于500 g(mL)的产品，应多抽几件。大包装产品以一袋(桶)为一件，随机抽取5~10件，在无菌条件下，每件取样500 g(mL)，然后将抽取样品混匀，按四分法分装3袋(瓶)，每袋(瓶)不少于500 g(mL)。

7.2　查验分类(略)

7.3　判断规矩

7.3.1　具下列任何一条款者，均为及格产品

a. 查验后果各项技能目标均切合尺度要求的产品;

b. 在产品的表面、水分、细度、pH值等检测项目中，有1项不切合要求，而别的各项技能目标切合要求的产品。

7.3.2　具下列任何一条款者，均为分歧格产品

a. 无效活菌数不切合技能目标;

b. 霉菌杂菌数不切合技能目标;

c. 杂菌率不切合技能目标;

d. 粪大肠菌群不切合技能目标;

e. 蛔虫卵殒命率不切合技能目标;

f. 砷、镉、铅、铬、汞中任一含量不切合技能目标;

g. 无机物料腐熟剂产品中所测酶活不切合技能目标;

h. 在表面、水分、细度、pH值等检测项目中，有2项(含)以上不切合要求。

8　包装、标识、运输和储存

拜见NY 885-2004《农用十大赌博产品标识要求》

附　录　A 常用检测培育基

拜见NY/T 1114-2004《十大赌博肥料实行用培育基技能条件》

附　录　B

(材料性附录)

常用染色剂

B.1　革兰氏染色剂

B.1.1　结晶紫染色液(Hucker氏配方)

甲液：结晶紫(Crystal violet) 2.0 g

乙醇(95%) 20.0 mL

乙液：草酸铵[(NH4)2C2O4•H2O] 0.8g

蒸馏水 80.0 mL

甲、乙两液相混，过滤，棕色瓶保管。

B.1.2　卢哥(Lugol)氏碘液

碘(I2)片 1.0 g

碘化钾(KI) 2.0 g

蒸馏水 300 mL

先溶碘化钾于大批蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，可稍加热，最初加足蒸馏水，棕色瓶保管。

B.1.3　脱色液 95%的乙醇液。

B.1.4　复染液 0.5%的番红水溶液(Safranin O)

2.5%的番红酒精溶液 20 mL

蒸馏水 80 mL

B.2　芽胞染色液

B.2.1　孔雀绿染色液(Malachite green)

孔雀绿 5.0 g

蒸馏水 100 mL

B.2.2　0.5%番红染色液

B.3　石碳酸复红染色液

甲液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 g

95%酒精 10.0 mL

乙液：石碳酸(Phenoecrystals C.P) 5.0 g

蒸馏水 95 mL

将甲、乙两液混淆后即得石碳酸复红染色液原液。染色时，将原液浓缩5~10倍利用。

附　录　C

(标准性附录)

浓缩法(MPN 5管法)

C.1　浓缩

称取样品10.0 g，参加带玻璃珠的100 mL的无菌水中(液体菌剂取l0.0 mL参加90 mL的无菌水中)，静置20 min，在旋转式摇床上200 r/min充实振荡30 min，即失掉1×101浓缩度的菌悬液。

用无菌移液管汲取5.0mL上述菌悬液参加到装有45mL无菌水的三角瓶中，充实振荡摇匀，失掉1×102浓缩度的菌悬液，依此办法制成1×103、1×104、1×105……浓缩度的菌悬液(每个浓缩度应改换无菌移液管)。

C.2　加样

选择相宜的5个一连浓缩度，用无菌移液管辨别汲取差别浓缩度的菌悬液1.0 mL，加到已预备好的盛有9.0 mL无菌培育基的螺笔试管中，每一浓缩度反复接5支试管(差别浓缩度间改换无菌移液管)，同时用无菌培育液尴尬刁难照。

C.3　培育

接种后立刻拧紧塑料帽并摇匀，将接种好的试管放到相宜的条件下培育。

C.4　盘算

依据各浓缩系列试管中有无待测十大赌博生长或其心理反响的正或负得出数目目标，并在响应的MPN统计表中查出类似值(见表C1)，即可盘算出待测样品的无效活菌数，以亿个/mL或亿个/g表现。

盘算办法：

1mL(g)样品中的无效活菌数=菌数类似值×数目目标第一位数的浓缩倍数

C.5　计数规矩

在浓缩系列中必需最初一个浓缩度一切反复间都没有十大赌博生长。确定命量目标系取浓缩系列中一切反复都有生长(或是正反响)的最高浓缩度为数目目标的第一位数字，统共取三个一连浓缩管的后果查表。

C.5.1　在所有5支试管中均呈现生长的浓缩度中，把呈现生长的浓缩度倍数最高的那一级放入数列。比方：为5-5-3-0-0时，则取5-3-0数列;

C.5.2　在所有5支试管中均不呈现生长的浓缩度中，把浓缩度倍数最低的那一级放入数列。比方：为5-3-0-0-0时，则取5-3-0数列;

C.5.3　假如使用上述两条规矩，会呈现接纳如5-5-4-3-0如许的4个品级的浓缩度的状况。此时，可先取后面的5-4-3数列，后取4-3-0数列，辨别求出lgMPN，然后算出其真数的均匀值。在此列中，数列5-4-3的lgMPN为1.447，数列4-3-0的lgMPN为0.431+1(后一数列与前一数列响应浓缩了10倍，故要加1举行校正)，(1.447+1.431)/2=1.439，以是MPN=27.5。

表C.1 MPN，lgMPN表

阳性试管数			MPN （相称于第一浓缩管1毫升）	LgMPN	阳性试管数			MPN （相称于第一浓缩管1毫升）	LgMPN
第一 浓缩管	第二 浓缩管	第三 浓缩管			第一 浓缩管	第二 浓缩管	第三 浓缩管
0	0	0	0	-	5	0	0	2.3	0.362
0	1	0	0.18	0.255-1	5	0	1	3.1	0.491
1	0	0	0.20	0.301-1	5	1	0	3.3	0.519
1	1	0	0.40	0.602-1	5	1	1	4.6	0.663
2	0	0	0.45	0.653-1	5	2	0	4.9	0.690
2	0	1	0.68	0.833-1	5	2	1	7.0	0.845
2	1	0	0.68	0.833-1	5	2	2	9.5	0.978
2	2	0	0.93	0.968-1	5	3	0	7.9	0.898
3	0	0	0.78	0.892-1	5	3	1	11.0	1.041
3	0	1	1.1	0.041	5	3	2	14.0	1.146
3	1	0	1.1	0.041	5	4	0	13.0	1.114
3	2	0	1.4	0.146	5	4	1	17.0	1.230
4	0	0	1.3	0.114	5	4	2	22.0	1.342
4	0	1	1.7	0.230	5	4	3	28.0	1.447
4	1	0	1.7	0.230	5	5	0	24.0	1.380
4	1	1	2.1	0.322	5	5	1	35.0	1.544
4	2	0	2.2	0.342	5	5	2	54.0	1.732
4	2	1	2.6	0.415	5	5	3	92.0	1.964
4	3	0	2.7	0.431	5	5	4	160.0	2.204
					5	5	5	>180.0	>2.255

附　录　D (略)